Вільний білірубін токсичний, не розчиняється у воді і циркулює в крові в комплексі з альбумінами. Цей білірубін дає непряму реакцію Ван ден Берга (після осадження альбумінів спиртом), тому називається непрямим.
Непрямий білірубін, будучи пов'язаним з альбумінами, не проходить через неушкоджені мембрани ниркових клубочків і не фільтрується в сечу.
Виведення білірубіну здійснюється з жовчю через кишечник. Білірубін, зв'язаний з альбуміном, доставляється кров'ю в печінку. Білірубін легко проникає через мембрани гепатоцитів, альбуміни залишаються в кровотоці. В гепатоцитах білірубін піддається кон'югації з глюкуроновою кислотою, перетворюючись на білірубінмоно- і диглюкуронід. Освічені білірубінглюкуроніди нетоксичні, легко розчиняються. Вони направляються з жовчю в кишечник для виведення з організму.
З кишечника білірубінглюкуроніди частково надходять в кровотік і, перебуваючи в крові, представлякгг собою фракцію прямого білірубіну, який дає пряму реакцію Ван ден Берга. Прямий білірубін, на відміну від непрямого, легко проникає через ниркові фільтри і може виділятися з сечею.
У фізіологічних умовах сироватка крові містить приблизно 25% прямого білірубіну (пов'язаного з глюкуроновою кислотою) і 75% непрямого білірубіну (альбумін-білірубіну).
Таким чином, загальний білірубін крові являє собою сумарну кількість непрямого і прямого білірубіну.
У здорових людей в сироватці крові міститься білірубіну 1,7-20,5 мкмоль / л-прямого - 0,4-5,1 мкмоль / л.
Для визначення білірубіну використовується колориметричний метод, основу якого складає реакція Ван ден Берга. Реакція протікає в дві стадії: на першій під впливом соляної кислоти розривається тетрапірроловая ланцюг і утворюються два діпіррола, на другий - обидва діпірролових похідних діазотіруются діазофенілсульфоновой кислотою з перетворенням їх у азобілірубін. Фракційне вміст білірубіну визначається за допомогою модифікованого методу Ван ден Берга, запропонованого Ендрассіком. Метод прийнятий як уніфікованого.
Принцип методу
Білірубін вступає в реакцію азосочетания з диазотированного сульфаниловой кислотою з утворенням розчину азокрасителя. Інтенсивність забарвлення пропорційна змісту білірубіну і виявляється фотометрически.
Оригінальним методом Ван ден Берга встановлюється лише характер реакції (пряма, непряма, уповільнена), тобто відзначається перевага в сироватці крові того чи іншого білірубіну. Метод Ендрассіка, Клеггорна і Грофа дає можливість фракційно визначати вміст білірубіну. Він простий, зручний в практиці, не пов'язаний із застосуванням дефіцитних реактивів і є найбільш прийнятним для практичних лабораторій.
Визначення рекомендується приводити відразу ж після забору проб, щоб уникнути окислення білірубіну на світлі. Гемоліз сироватки знижує кількість білірубіну пропорційно присутності гемоглобіну. Отже, сироватка крові не повинна бути гемолізовані.
Найцікавіші новини