Лейкоцитів набагато менше, ніж еритроцитів (1-2 на великий квадрат), тому для точності підрахунок виробляють у 100 великих квадратах (неразграфленних). Розрахунок: у 100 великих квадратах (1600 малих) злічило а лейкоцитів. Пам'ятаючи, що обсяг малого квадрата дорівнює 1/4000 мм3, а кров розлучена в 20 разів, розраховують кількість лейкоцитів в 1 мкл крові: 4000 ґ 20 і ділять на 1600 = а х 1/2. Практично для отримання дійсного вмісту лейкоцитів в 1 мкл крові достатньо отримане при підрахунку число розділити навпіл і приписати 2 нуля. В середньому помилка методу становить ± 7%.
Більш точним (помилка 2-3%) і досконалим є підрахунок лейкоцитів за допомогою електронних апаратів. Підрахунок лейкоцитів в лічильниках частинок виробляють за тим же принципом, що і еритроцитів. Попередньо кров розводять і змішують з яким-небудь лізуючого еритроцити реактивом. У автоаналізаторе "Технікон" в якості такого застосовують розчин оцтової кислоти, в апаратах "Культера" і "Целлоскоп" - сапонін або сапоглобін, які додають розведеними (1: 500, 1: 700) у фізіологічному розчині хлориду натрію (6 крапель на 20 мл розведення).
Підрахунок лейкоцитарної формули крові виробляють в забарвлених мазках периферичної крові. Вважати краще ближче до кінця мазка в найтоншому місці, не менш 200 клітин (виняток становлять виражені лейкопенії), а потім виводять процентне співвідношення окремих видів лейкоцитів. Підрахунок рекомендується проводити в одному порядку: половину клітин вважати у верхній, половину - в нижній частині мазка, не заходячи на самий край і середину, по зигзагу (3-4 поля зору уздовж мазка, 3-4 поля під прямим кутом до середини мазка, потім 3-4 поля в сторону паралельно краю, знову під прямим кутом вгору і так далі в одну сторону).
Приготування мазків. Ретельно вимитим і знежиреним предметним склом (його краєм) торкаються до краплі крові на місці уколу. Мазок роблять шліфувальним склом, поставивши його під кутом в 45 ° до предметного скла попереду краплі. Підбивши скло до цієї краплі, чекають, поки кров розпливеться уздовж його ребра, потім швидким легким рухом проводять шліфувальне скло вперед, не відриваючи від предметного раніше, ніж вичерпається вся крапля.
Правильно зроблений мазок має жовтуватий колір (тонкий), не досягає країв скла і закінчується у вигляді сліду (вусів).
Фарбування сухих мазків проводять після попередньої фіксації. Краща фіксація досягається в абсолютному метиленовими спирті (3-5 хв) або в суміші Нікіфорова з рівних частин абсолютного етилового спирту і ефіру (30 хв).
До основних гематологічним фарбам відносять метиленовий синій і його похідне - АЗУР I (метиленовий Аззурового) і АЗУР II (суміш рівних частин Азура I і метиленового синього), до кислих - водорозчинний жовтий еозин.
# 9679- Забарвлення за Романовським-Гімзою. Фарба Романовського-Гімза (заводського приготування) має наступний склад: АЗУР II - 3 г, водорозчинний жовтий еозин - 0,8 г, метиловий спирт - 250 мл і гліцерин - 250 мл. Робочий розчин фарби готують з розрахунку 1,5-2 краплі готової фарби на 1 мл дистильованої води. Фарбу наливають на мазок можливо більш високим слоем- тривалість забарвлення - 30-35 хв. Після закінчення цього терміну мазки промивають водою і висушують на повітрі. При цьому способі вдається добре диференціювати ядро, але набагато гірше - нейтрофільних зернистість цитоплазми, тому його широко використовують для фарбування мазка периферичної крові.
# 9679- Комбінована забарвлення Мая-Грюнвальда-Романовського-Гімза по Паппенгейм. На фіксований мазок наливають піпеткою готовий барвник - фіксатор Мая-Грюнвальда, що представляє собою розчин еозінметіленового синього в метиленовими спирті, на 3 хв. Через 3 хв до покриває розчин фарбі додають рівну кількість дистильованої води і продовжують фарбування ще 1 хв. Після цього фарбу змивають і мазок висушують на повітрі. Потім висушений мазок дофарбовують свіжоприготовленим водним розчином фарби Романовського протягом 8-15 хв. Цей метод вважається найкращим, особливо для фарбування мазків кістково-мозкових пунктатов.
Збільшення числа лейкоцитів у периферійній крові вище нормального рівня називають лейкоцитозом, зменшення - лейкопенією. Лейкоцитоз (лейкопенія) рідко характеризується пропорційним збільшенням (зменшенням) числа лейкоцитів всіх видів, наприклад лейкоцитоз при згущенні крові. В більшості випадків є збільшення числа (зменшення) якого-небудь одного типу клітин. Збільшення або зменшення числа окремих видів лейкоцитів у крові може бути відносним або абсолютним залежно від загального вмісту лейкоцитів - нормального, підвищеного або зниженого. Зміна числа, співвідношення окремих форм та морфології лейкоцитів залежить від виду та вірулентності збудника, характеру, перебігу та поширеності патологічного процесу, індивідуальної реакції організму.
Найцікавіші новини