Вміст рівномірно розподіляють на предметному склі. Мазки висушують на повітрі і фарбують.
Забарвлення метиленовим синім
Необхідний реактив
1% -ний водний розчин метиленового синього.
Хід забарвлення
На висушений препарат наносять 1-2 краплі метиленового синього, покривають покривним склом. Фарбують протягом 1-2 хв. Потім мазок промивають дистильованою водою наступним чином: у одного краю покривного скла наносять 1-2 краплі дистильованої води, до протилежного краю прикладають смужку фільтрувального паперу. Таким чином препарат промивають кілька разів до отримання блідо-синього забарвлення, потім висушують.
Забарвлення фуксином
Необхідний реактив
3 г кислого фуксину розчиняють в 100 мл 95 ° -ного спирту. До 12 мл цього розчину додають 100 мл дистильованої води.
Хід забарвлення
На висушений препарат наливають фуксин на 1 хв, потім змивають водою, висушують. Таким же способом можна фарбувати мазки і метиленовим синім.
Забарвлення гематоксилін-еозином
Необхідні реактиви
1. Суміш Никифорова.
2. Водний розчин гематоксиліном (гематоксилін - 1 г, калійні галун - 50 г, йодистий натрій або калій - 0,2 г, дистильована вода - 1000 мл-розчин витримують на світлі протягом 14 днів, після чого він готовий до вживання).
3. 1% -ний водний розчин еозину.
Хід забарвлення
Висушені мазки фіксують в суміші Нікіфорова (10-15 хв). Фарбують водним розчином гематоксиліном протягом 7-10 хв до слабо-фіолетового кольору. Промивають проточною водою. Фарбують 1% -ним водним розчином еозину протягом 30 сек. Промивають проточною водою і висушують.
Забарвлення за Романовським
Необхідний реактив
У продажу є готовий розчин фарби Романовського наступного складу: АЗУР II - 3 г-еозин водорозчинний жовтий - 0,8 г-метиловий спирт - 250 мл-гліцерин - 250 мл.
У продажу є також суха фарба Романовського, з якої готують розчин фарби наступним чином: 3,8 г сухої фарби Романовського розчиняють в 250 мл чистого метилового або етилового спирту (останній гірше). Розчин залишають на 3-5 доби, часто збовтуючи для кращого розчинення фарби. Потім додають 250 мл чистого гліцерину і знову залишають на 3-5 доби, періодично збовтуючи. Приготована таким чином фарба добре зберігається тривалий час в темних бутлях в шафі, де немає ні кислот, ні лугів, без збовтування.
Знову отриманий або приготовлений розчин фарби Романовського перед вживанням оттітровивают, тобто забарвлюють кілька фіксованих мазків протягом 25-40 хв різному розведеною фарбою (1-2 краплі фарби на 1 мл дистильованої води). За добре забарвленого препарату встановлюють потрібну кількість крапель фарби на 1 мл і час фарбування.
Хід забарвлення
Фіксовані мазки укладають на місток для фарбування, що представляє собою скляні палички, укладені на два протилежних краю кювету. Потім мазки заливають фарбою в розведенні 1-2 крапель на 1 мл дистильованої води. Фарбу наливають на мазок якомога вищим шаром, і фарбування триває в залежності від температури повітря в приміщенні від 25 до 45 хв. Якщо температура в приміщенні низька або потрібно швидше забарвити мазки, то розведену фарбу можна підігрівати до 60-70 ° С (до кипіння доводити не можна).
Після закінчення забарвлення фарбу змивають (але не зливають) сильним струменем води і ставлять мазки вертикально в дерев'яний штатив для просушування. Розлученій фарбою можна користуватися тільки протягом одного дня.
Забарвлення по Папаніколау
Необхідні реактиви
1. Суміш Никифорова.
2. Спирти 95, 90, 80, 70 і 50 °.
3. Гематоксилін Гарріса.
4. 0,25% -ний розчин соляної кислоти.
5. Фарба помаранчева Г.
6. Фарба (ЕА-36).
7. Абсолютний спирт.
8. Ксилол.
9. Канадський бальзам.
Приготування гематоксиліном Гарріса
1 г гематоксиліном розчиняють в 10 мл абсолютного спирту, 20 г калійних квацов розчиняють при нагріванні в 200 мл дистильованої води. Через 24 год обидва розчини з'єднують і додають 0,5 г червоної або жовтої окису ртуті. Розчин нагрівають до кипіння, остуджують і через 24 год фільтрують.
Приготування розчину фарби помаранчева Г
До 100 мл 0,5% -ного спиртового розчину помаранчевої фарби Г додають 0,015 г фосфорно-вольфрамової кислоти.
Приготування складовою фарби (ЕА-36)
45 мл 0,5% -ного спиртового розчину світлої зеленої, 10 мл 0,5% -ного спиртового розчину бісмаркбраун, 45 мл 0,5% -ного спиртового розчину еозину жовтуватого (водо- і спирторозчинні), 0,2 г фосфорновольфрамовой кислоти , крапля насиченого водного розчину вуглекислого літію.
Хід забарвлення
Мазки після фіксації проводять послідовно через судини, що містять 80, 70 і 50 ° спирти і дистильовану воду. Потім 6 хв гематоксилином Гарріса, обережно споліскують дистильованою водою і занурюють (6 разів) в 0,25% -ний розчин соляної кислоти. Далі на 6 хвилин кладуть у посудину з проточною водопровідною водою і обмивають дистильованою водою. Потім проводять через 50, 70, 80 і 95 ° спирти. Зневоднені таким чином препарати забарвлюють протягом 1,5 хв фарбою помаранчевої Г, споліскують в двох змінах 95 ° спирту і фарбують протягом 1,5 хв складовою фарбою (ЕА-36). Мазки відмивають від надлишку фарби в трьох змінах 95 ° спирту. Далі препарати прояснюють проведенням через абсолютний спирт, через суміш абсолютного спирту і ксилолу в рівних обсягах і, нарешті, через ксилол, після чого укладають в канадський бальзам.
З наведених вище забарвлень найпростіші - забарвлення фуксином і метиленовим синім, але ці забарвлення не дають повного уявлення про всю цитологічної картині. Метод Папаніколау складний, вимагає багато дефіцитних і дорогих реактивів, тому рідше використовується в практичній роботі лабораторій. Забарвлення за Романовським цілком придатна для цитологічного дослідження вагінальних мазків і вигідно відрізняється тим, що може застосовуватися в будь-якій лабораторії.
Клітинний склад вагінального мазка
В мазках з піхви розрізняють 4 види клітин плоского епітелію.
1. Клітини поверхневі великі (35-55 мк), полігональної форми, ядро маленьке (6 мк), пікнотичних. Клітини частіше розташовуються роздільно. Цитоплазма клітин дуже слабо забарвлюється, ядро темне. У великій кількості зустрічаються головним чином з 9 по 14-й день менструального циклу.
2. Проміжні клітини великі (25-30 мк), форма неправильна, ядро більш велике, кругле або овальне. Клітини часто розташовуються пластами. Цитоплазма забарвлюється інтенсивніше, ніж у поверхневих клітин, ядро більш світле. Зустрічаються у всіх фазах менструального-оваріального циклу.
3. Парабазальні клітини - менших розмірів, круглої або овальної форми, з великим круглим ядром. Діаметр ядра трохи менше, ніж ширина обідка цитоплазми. Фарбуються частіше в базофільні тони. Іноді морфологічні риси парабазальних клітин неясно відрізняються від клітин базальних.
4. Клітини базальні (або атрофічні) - округлої форми, дещо менших розмірів, ніж парабазальні, ядро кругле, велике, займає більшу частину клітини. Цитоплазма забарвлюється в інтенсивні базофільні тону (деякі автори називають клітини з такою морфологією парабазального-базальними). Клітини зустрічаються під час менопаузи і поодинокі під час менструацій і після пологів.
Слизова оболонка піхви в нормі вистелена багатошаровим плоским епітелієм. Залежно від співвідношення клітин різних шарів епітелію в мазках розрізняють 4 типи клітинних реакцій, які дозволяють судити про функціональний стан яєчників.
1. Багато базальних клітин і велика кількість лейкоцитів. Цей тип мазка вказує на різку недостатність гормонів яєчників (естрогенів).
2. У мазку значна кількість базальних клітин, досить багато проміжних, значна кількість лейкоцитів. Відповідає помірно вираженій недостатності гормонів.
3. У мазку переважають проміжні клітини, іноді нечітко контуровані, можуть лежати пластами. Базальних клітин небагато. Така картина мазка вказує на легку ступінь недостатності естрогенів.
4. Мазок складається з поверхневих клітин. Такий тип мазка відповідає достатньою секреції естрогенів.
Дослідження вагінального мазка не можна робити при наявності запальних процесів (виділень), після вагінальних маніпуляцій, при внутрівлагаліщном застосуванні медикаментів. Після статевих зносин мазки беруть не раніше ніж через 24 годин.
Тест вагінального мазка застосовується для встановлення показань і контролю над результатами гормонотерапії. У жінок з нормальним овариально-менструальним циклом картина вагінальних мазків в залежності від фази циклу може бути третьою або четвертою (фаза проліферації - третій тип реакції, в період овуляції і в найближчі дні після неї - третій або четвертий).
Для вирішення питання про функціональний стан яєчників застосовують ряд цитохимических (визначення глікогену і ферментів в клітинах) і біохімічних методів (визначення ферментів у вагінальному вмісті, кислотності, молочної кислоти та ін.).
Для дослідження вагінальних мазків також використовується люмінесцентна і фазовоконтрастная мікроскопія, дані якої доповнюють трактування функціонального стану яєчників. Для більш правильної оцінки вагінального мазка, крім виду клітин і їх кількості, враховують так звані індекси- найбільше значення вони мають для судження про порушення функції яєчників. До таких індексам відносяться:
1) каріопікнотіческій індекс - відношення числа поверхневих клітин з пікнотичної ядрами до загального числа клітин мазка;
2) атрофічний індекс (індекс глибоких клітин) - відношення числа базальних і парабазальних клітин до загального числа клітин мазка;
3) індекс проміжних клітин - відношення числа проміжних клітин до загального числа клітин мазка;
4) еозинофільний індекс - відношення числа ацидофільних поверхневих клітин до загального числа базофільних поверхневих клітин.
Всі індекси виражаються у відсотках.
Найцікавіші новини