Хімічні реакції на кров
Принцип методів
Каталітичне властивість гемоглобіну і окислення речовин в присутності окислювачів (перекис водню, азонірованний скипидар та ін.) З утворенням кольорової реакції.
Бензидинове проба
Необхідні реактиви
1. Основний бензидин.
2. Розчин оцтової кислоти 50% -ний, перед вживанням трохи бензидина (на кінчику ножа) розчиняють в 5 мл оцтової кислоти.
3. Розчин перекису водню 3% -ний або (краще) пергідроль, розведений в 10 разів.
Хід дослідження
До 3-5 мл сечі додають 2-3 краплі розчину бензидину в оцтової кислоти і стільки ж перекису водню, перемішують. Позитивна реакція на кров дає зелене або синьо-зелене забарвлення протягом перших 2 хв. Фарбування, що настало після 2 хв, не враховується.
Замість перекису водню можна користуватися перекисом барію. 0,025 г основного бензидина і 0,1 г перекису барію розчиняють в 5 мл 50% -ної оцтової кислоти. Реактив готують безпосередньо перед вживанням.
Хід дослідження
До 3-5 мл сечі додають 2-4 краплі реактиву, відзначають зміну кольору в перші 2 хв. У позитивному випадку з'являється синьо-зелене забарвлення.
Бензідііовая проба вважається найбільш чутливою.
Проба з гваякової смолою (Вебера ван Деена)
Необхідні реактиви
1. Крижана або 80% оцтова кислота.
2. Спирт 96 °.
3. Ефір.
4. Свежеприготовленная гваяковая настоянка: розтерту в порошок гваякове смолу, взяту на кінчику ножа, всипають в суху пробірку, доливають 2-6 мл спирту, дають відстоятися, для реакції беруть відстояну рідину без осаду.
5. 3% -ная перекис водню.
6. Хлороформ.
Хід дослідження
3-5 мл сечі розводять оцтовою кислотою і доливають однакову кількість ефіру, ретельно розмішують і зливають в пробірку. Дають відстоятися. Ефірний шар переносять в іншу чисту пробірку, доливають 15-20 крапель гваякової настойки, 10-15 крапель перекису водню. При наявності крові негайно або через 1-3 хв з'являється синє або фіолетове забарвлення.
Спрощена гваяковая проба
Невелика кількість сечі наносять на паперовий фільтр, покладений на чашку Петрі. На нього накапують порівну (по 2-3 краплі) оцтової кислоти, гваякової настоянки і перекису водню. У присутності крові з'являється синьо-зелене забарвлення.
Пірамідоновая проба
Необхідні реактиви
1. 5% -ний спиртовий розчин пірамідону (амидопирина).
2. 30% -ний розчин оцтової кислоти.
3. Перекис водню.
Хід дослідження
Беруть рівні кількості сечі і розчину пірамідону (по 2-3 мл), додають по 10-12 крапель оцтової кислоти і перекису водню. У присутності крові з'являється синьо-фіолетове забарвлення. Інтенсивність і час появи забарвлення залежать від кількості крові. Негативна відповідь дається через 2-3 хв.
Визначення гемоглобіну
Для діагнозу гемоглобинурии необхідно довести наявність гемоглобіну в сечі одній з хімічних проб. При відсутності еритроцитів в осаді (при мікроскопічному дослідженні) бажано спектроскопічно визначити природу пігменту.
Визначення гемосидерину. Реакція на берлінську лазур
Необхідні реактиви
1. 5% -ний розчин соляної кислоти.
2. 2-5% -ний водний розчин залозисто-сінеродістого калію (жовта кров'яна сіль).
Хід дослідження
Центрифугують 15 мл сечі. До осаду додають декілька крапель соляної кислоти і кілька крапель залозисто-сінеродістого калію. Роблять препарат і мікроскопіруют. Через 2-5 хв (можливо і раніше) в клітинах в позитивному випадку видно синьо-зелені зернятка. При руйнуванні клітин гемосидерин лежить вільно.
Гемосидерин в сечі зустрічається головним чином при гемолітичних анеміях з внутрішньосудинним гемолізом (хвороба Маркіафави-Мікеле та ін.).
Найцікавіші новини