Визначення глюкози в спинномозковій рідині здійснюється за допомогою кольорової реакції або на біохімічному аналізаторі так само, як і в крові.
У нормі в лікворі міститься глюкоза в межах 2,8-3,9 ммоль / л. При гострому та підгострому серозний менінгіт вміст глюкози збільшується. Збільшення її вмісту в лікворі при нормальному вмісті в крові спостерігається при явищах подразнення оболонок мозку.
Визначення вмісту глюкози в спинномозковій рідині повинно проводитися з дослідженням цукру крові.
Уніфікований газооксідазний метод по окисленню ортотолуідіна
Глюкозооксидаза окисляє глюкозу з утворенням перекису водню, яка під дією перексідази окисляє ортотолуідін з утворенням синього хромогену. Обидві реакції протікають одночасно при рН 4,8.
Необхідні реактиви:
1. Натрію хлорид - 9 г / л (ізотонічний розчин). Готують, розчиняючи 0,9 г NaCl в 100 мл рідини.
2. Цинку сульфат - 50 г / л, 5 г сульфату цинку (ZnSO4) розчиняють у воді, об'єм доводять до 100 мл.
3. натр їдкий - 0,3 ммоль / л готують, розчиняючи у воді, доводять до 100 мл.
4. натр їдкий - 0,3 ммоль / л готують, розчиняючи 1,2 г NaOH в 100 мл води, концентрацію перевіряють титруванням.
5. Ортотолуідіна 1% -ний розчин: 1 г препарату розчиняють в 100 мл 96 ° спирту. Розчин можна зберігати в холодильнику в склянці з притертою пробкою протягом декількох місяців.
6. Ацетатний буферний розчин pH 4,8: змішують 4 частини 0,25 г оцтової кислоти і 6 частин 0,25% -ного ацетату натрію.
7. Глюкозооксидаза. Сухий препарат активністю 3000 ОД / мг або більше.
8. Пероксидаза з крові - 1 мл розчиняють в 5 мл ацетатного буфера.
9. Робочий реактив: в 80 мм ацетатного буфера розчиняють 2 мг глюкозооксидази та 1 мг пероксидази, додають 1 мл 1% -ного розчину ортотолуідіна і доводять об'єм буферним розчином до 100 мл. Робочий реактив повинен бути прозорим, безбарвним або мати слабо-зелений відтінок, в цьому випадку він стійкий при зберіганні на холоді. Якщо ж забарвлення інтенсивна або через кілька годин після зберігання починає випадати осад, це означає, що ортотолуідін недостатньо чистий і його треба перекристалізованої.
10. Калібрувальні розчини глюкози. Глюкозу попередньо висушують при 37 ° С і зберігають в ексикаторі. Спочатку готують основний розчин з концентрацією 50 ммоль / л, для чого 180 мл речовини розчиняють в 20 мл насиченого розчину 0,3% -ної бензойної кислоти. З цього розчину готують робочі калібрувальні розчини, які містять 3, 6, 9, 12, 15, 18 і 21 ммоль / л. Для цього беруть 0,6- 1,2- 1,8- 2,4- 3- 3,6 і 4,2 мл основного розчину і доводять насичення розчином до 10 мл.
Хід визначення
У центріфуженние пробірки вносять 1,1 мл сульфату цинку і 0,4 мл 0,3% -ого розчину NaOH, перемішують. При цьому утворюється тонкий гель гідрату окису цинку, в нього впускають 0,1 мл спинномозкової рідини, знову перемішують і протягом 10 хв центрифугують. До 1 мл надосадової рідини додають 3 мл робочого реактиву і обережно перемішують. Поступово розвивається забарвлення, яке виникає максимум через 13-15 хв, а потім поступово зменшується. Фотометрують через один і той же проміжок часу після додавання робочого реактиву в кюветах з довжиною оптичного шляху 1 см, довжина хвилі 625 нм холостого досвіду. При приготуванні калібрувального графіка замість проб крові беруть 0,1 мл відповідного калібрувального розчину. Розрахунок можна проводити по каліброване графіком, для побудови якого на одній осі відкладають концентрацію глюкози (моль / л), а на іншій - величини екстинкції.
Визначення хлоридів. Визначення хлоридів може здійснюватися методом титрування або на електролітному аналізаторі.
Знижений вміст хлоридів у лікворі характерно для менінгіту, особливо туберкульозного, при бруцельозі, підвищений - при пухлинах мозку, абсцесах мозку, ехінококозі.
Визначення сечовини, білірубіну, холестеріна.Імеет невелике діагностичне значення.
Визначення гликопротеинов і ліпопротеїнів спинномозкової рідини роблять за допомогою електрофорезу на папері з попередніми згущенням рідини.
Найцікавіші новини