Креатинін - ангідрид креатину, утворюється в м'язах з креатинфосфату, разом з креатином міститься у фракції залишкового азоту крові. Креатинін є постійною складовою частиною сечі. Добове виділення креатиніну з сечею постійно і пропорційно загальній м'язовій масі тіла.
В якості уніфікованого методу при визначенні концентрації креатиніну в крові та сечі запропонований метод Поппера, заснований на реакції Яффі. Вітчизняні та імпортні набори для визначення рівня креатиніну містять всі необхідні реагенти для виконання дослідження даним методом.
Принцип методу
У лужному середовищі пікринової кислота взаємодіє з креатинином з утворенням оранжево-червоного забарвлення (реакція Яффе - утворення таутомерію пікрату креатиніну), яку вимірюють фотометрически.
Визначення в сироватці крові проводять після депротеінізірованія, в сечі - після розведення водою. Визначення не зовсім специфічно, интерферируют речовини з активною метиленової групою і деякі відновлюють речовини, наприклад глюкоза, ацетон, ацетоуксусная і піровиноградна кислоти.
Вміст креатиніну сироватки крові:
чоловіки - 61-115 мкмоль / л або 0,061-0,115 ммоль / л;
жінки - 53-97 мкмоль / л або 0,053-0,097 ммоль / л.
Сечу перед аналізом розводять дистильованою водою у співвідношенні 1: 100 (результат множать на 50).
Необхідні реактиви
1. Пікринова кислота, насичений розчин. Товарна пікринової кислота містить 15-20% вологості-кислота не сушити! Вибухонебезпечне! У 100 мл води розчиняють 2 г пікринової кислоти при нагріванні на гарячій водяній бані. Після цього розчин залишають стояти на 24 год, періодично перемішуючи. Потім розчин фільтрують. Реактив стабільний. Зберігають у темному посуді.
2. НСl, 0,1 моль / л.
3. Основний калібрувальний розчин креатиніну, 10 ммоль / л: 113,1 мг креатиніну доводять до 100 мл 0,1 моль / л розчином НСl. Зберігають у холодильнику в посуді з притертою пробкою. Для визначення креатиніну в сироватці крові робочий калібрувальний розчин отримують розведенням основного розчину водою в 100 раз-1 мл розчину містить 0,1 ммоль креатиніну.
4. натр їдкий, 2,5 моль / л.
Хід визначення
Визначення креатиніну в сироватці крові: 2 мл сироватки змішують з 6 мл насиченого розчину пікринової кислоти. Через 5 хв пробірку поміщають на 15-20 сек. в киплячу водяну баню, потім центрифугують. До 4 мл центрифугата додають 0,2 мл 2,5 моль / л розчину їдкого натру і ретельно змішують. Іноді після подщелачивания розчин мутніє внаслідок випадання фосфатів. У цьому випадку розчин ще раз центрифугують. Потім розчин доводять до об'єму 10 мл водою. Через 10 хв (пізніше 20 хв) вимірюють в кюветі з товщиною шару в 2 см при довжині хвилі 500-560 нм (зелений світлофільтр) проти холостий проби.
Холоста проба: 3 мл насиченого розчину пікринової кислоти і 0,2 мл 2,5 моль / л розчину їдкого натру доводять до об'єму 10 мл водою.
Розрахунок роблять за каліброване графіком.
Побудова калібрувального графіка: з робочого калібрувального розчину креатиніну готують розведення, як зазначено нижче.
Через 10 хв проводять виміри при тих же умовах, що і досвідчені проби. Калібрувальна крива линейна до 260 мкмоль / л креатиніну.
Визначення рівня креатиніну в сечі
У мірній колбі або циліндрі місткістю 100 мл змішують 0,5 мл сечі (з добової кількості) з 3 мл розчину пікринової кислоти. Суміш ретельно струшують і додають 0,2 мл 2,5 моль / л розчину їдкого натру. Витримують при кімнатній температурі протягом 10 хв. Доводять об'єм до 100 мл водою. Вимірюють на фотометрі в кюветі з товщиною шару в 1 см при довжині хвилі 500-600 нм (зелений світлофільтр) проти холостий проби.
Холоста проба: 3 мл розчину пікринової кислоти і 0,2 мл 2,5 моль / л розчину їдкого натру доводять водою до об'єму 100 мл. Розрахунок роблять за формулою при порівнянні з калібрувальної пробій.
Калібрувальна проба: до 0,5 мл основного калібрувального розчину додають 3 мл розчину пікринової кислоти і 0,2 мл 2,5 моль / л розчину їдкого натру. Далі проби обробляють так само, як досвідчені.
К = Ск ґ Еоп ґ а / Ек ґ б,
де К - кількість креатиніну в сечі, мкмоль;
Ск - кількість креатиніну в калібрувальної пробі, 50 мкмоль;
Еоп - екстинкція дослідної проби;
Ек - екстинкція калібрувальної проби;
а - добова кількість сечі;
б - кількість сечі, взятої для аналізу.
Клініко-діагностичне значення
Порушення виділення креатиніну нирками спостерігається лише при далеко зайшли патологічних процесах в них. Стійке підвищення рівня креатиніну в крові аналогічно підвищенню рівня сечовини вказує на порушення роботи ниркового фільтра і може вважатися раннім показником ниркової недостатності. Підвищення вмісту креатиніну в сироватці крові відзначається не тільки при нирковій недостатності і прогресуючих дифузних захворюваннях нирок, але також при закупорці сечових шляхів, кишкової непрохідності (ілеус), важкому діабеті, декомпенсації серця, гострої жовтої атрофії печінки, механічної жовтяниці, гіпофункції надниркових залоз, хлоріпрівной азотемии , голодуванні і вагітності. Азотемія при простатиті не дає підвищення креатиніну.
Зниження рівня креатиніну відзначається при анемії, після введення АКТГ.
Вміст креатиніну в сечі залежить від харчування. Крім ендогенного креатиніну в сечі міститься креатинін екзогенний, що надходить з м'ясної їжі.
Підвищення змісту його в сечі спостерігається при посиленій м'язовій роботі, гарячкових станах (при яких відбувається більш інтенсивний розпад білків протоплазми), пневмонії, недостатності печінки.
Зниження рівня спостерігається при м'язовій атрофії, дегенерації нирок, амілоїдозі нирок, лейкемії.
Одночасне визначення у одного і того ж пацієнта концентрації креатиніну в крові та сечі значно розширює можливості дослідження функціонального стану нирок, дозволяючи отримати більш надійну інформацію про процеси фільтрації, реабсорбції і секреції.
Найцікавіші новини