Забарвлення по Граму
Необхідні реактиви
1. Карболовий розчин генціанвіолета (1 г генціанвіолета розчиняють в 10 мл 96 ° спирту, розчин виливають в 100 мл 1-2% -ної карболової кислоти, збовтують).
2. Розчин Люголя (1 г йоду, 2 г йодистого калію і 300 мл дистильованої води-йод і йодистий калій розчиняють спочатку в 5-8 мл води, а потім доливають решту води).
3. 96 ° спирт або сирець.
4. 40% -ний розчин карболового фуксину (10 мл карболового фуксину і 90 мл дистильованої води).
Хід забарвлення
На фіксований препарат кладуть смужку фільтрувального паперу і наливають розчин генціанвіолета. Фарбують протягом 1,5-2 хв. Папірець скидають і заливають препарат розчином Люголя на 2 хв. Розчин Люголя зливають і прополіскують препарат в спирті до сіруватого кольору. Промивають водою і забарвлюють 10% -ним розчином карболового фуксину протягом 10-15 сек. Знову промивають водою, висушують препарат на повітрі.
По своїй морфології паличка Деферлейна груба, товста, грамположительная. Розрізняють 4 ступені чистоти піхви (див. Вище).
Основною умовою для існування вагінальної палички є високий ступінь кислотності (рН 4,0-4,7). Під піхвовому вмісті і в епітелії міститься у великій кількості глікоген.
Існує тісний зв'язок між рН піхви і кількістю глікогену. Кокковая флора відповідає низькому вмісту глікогену та низького ступеня кислотності вагінального вмісту. Ступінь чистоти може служити відносним тестом функціонального стану піхви, особливо при аномаліях менструального циклу.
Дослідження на трихомонади
Приготування нативного препарату
Краплю виділень з піхви, взятого піпеткою або петлею, наносять на предметне скло, покривають покривним і негайно мікроскопіруют. В нативному препараті виявляють рухомі форми, які розпізнаються по характерному руху ундулирующей мембрани. Після втрати руху мікроорганізм в нативному препараті розпізнати можна.
Пофарбовані препарати
Краплю виділень розподіляють на склі тонким шаром. Мазки висушують. Для фарбування запропоновано багато різних методів: метиленовий синій, забарвлення за Грамом, метод Романовського та ін.
З перерахованих методів найбільш зручним є метод Романовського. При цій забарвленням трихомонади розпізнаються легко (ядро фіолетове, протоплазма вакуолізірована блакитна, що містить бактерії). При цьому добре видно навколишній їх клітинний фон (нейтрофіли, еозинофіли і епітеліальні клітини). У мазках, пофарбованих метиленовим синім, трихомонади легко сплутати із зміненими клітинами.
Бактеріоскопічне дослідження
Отделяемое піхви досліджують в основному для виявлення гонококів. У деяких випадках можна виявити й інші патогенні мікроорганізми:
1) паличка дифтерії при дифтерії статевих органів. Істинну природу виявленої палички встановлюють тільки шляхом бактеріологічного дослідження і перевіркою на вірулентність. Дифтерія статевих органів - дуже рідкісне захворювання;
2) Bacillus crassus - збудник гострої виразки вульви чапин-Люпшютца. У цьому випадку при бактеріологічному дослідженні мазків гнійного виділення, пофарбованих за Грамом, виявляють грампозитивні палички довжиною від 7-8 до 40 мк, з обрізаними кінцями, розташовані іноді короткими ланцюжками, а іноді лежать внутрішньоклітинно. Поразка вульви і піхви може бути також грибкової природи (наприклад, грибок молочниці).
Дослідження навколоплідних вод
Виливаються води при розриві плодового міхура приймають іноді за підтікає сечу. Правильність трактування в таких випадках встановлюється мікроскопічним дослідженням.
Необхідні реактиви
1. Розчин Судану 3.
2. 1% -ний водний розчин еозину.
Хід дослідження
Зібрану рідину поміщають в центрифужную пробірку і центрифугують. Надосадову рідину зливають, з осаду готують препарати і мікроскопіруют.
Елементи навколоплідних вод: "лусочки" плоду-Пушкова волосся (lanugo) - краплі жиру.
Визначення "лусочок"
Краплю осаду наносять на скло і покривають покривним склом. Тонким кінцем піпетки з балоном впускають під покривне скло краплю 1% -ного водного розчину еозину, який рівномірно фарбує препарат. Надлишок фарби відсмоктують фільтрувальної папером з протилежного краю покривного скла. Потім точно таким же шляхом препарат промивають водою. При мікроскопії на рожевому тлі виявляють незабарвлені, добре контуровані без'ядерні клітини шкіри плоду ("лусочки"), які часто лежать скупченнями. "Луска" не сприймають забарвлення еозином, так як вони покриті первородним мастилом (жир). Клітини вагінального епітелію фарбуються в яскраво-рожевий колір-ядра добре виражені.
Визначення жиру
До краплі осаду додають краплю розчину Судану 3, покривають покривним склом. При мікроскопії видно краплі жиру, пофарбовані в оранжевий колір. При визначенні жиру в навколоплідних водах потрібно ретельно оброблена посуд (знежирена).
Виявлення Пушкова волосся (lanugo) виробляють в нативному препараті.
Визначення "лусочок" дає 99% позитивних знахідок при дослідженні раннього відходження навколоплідних вод, виявлення крапель жиру - в 100%, lanugo виявляються рідко.
Дослідження на гонококи
Взяття матеріалу
У жінок відокремлюване беруть одночасно з уретри, піхви і шийки матки. Виділення з бартолінієвих залоз досліджують тільки за клінічними показаннями. Іноді беруть виділення з прямої кишки: через 3-4 годин після спорожнення кишечника роблять змив фізіологічним розчином, який центрифугують, після чого досліджують осад.
У чоловіків беруть виділення з уретри (вранці до першого сечовипускання), секрет простати, отриманий після масажу залози, або сечу, виділену після масажу. Крім того, досліджують сечу, зібрану вранці після тривалого утримання від сечовипускання. У дівчаток відокремлюване беруть з уретри, піхви і прямої кишки (промивні води).
З отриманого матеріалу готують тонкі мазки. Якщо матеріалом для дослідження служить сеча, то препарати готують з осаду після центрифугування.
Забарвлення препаратів
Висушені і фіксовані над полум'ям препарати (роблять, як правило, не менше двох препаратів) забарвлюють по Граму і метиленовим синім.
Забарвлення метиленовим синім
Фіксовані препарати заливають 0,5-1% -ним водним розчином метиленового синього на 1 мин- промивають водою і висушують.
Забарвлення по Граму
Забарвлення по Граму вимагає особливої ретельності, так як при недостатньому знебарвленні гонококи можуть зберегти забарвлення Грама, при дуже тривалому знебарвленні забарвлення можуть втрачати інші грампозитивні коки (стафілококи, стрептококи). Це може повести до помилкових результатів. Для цитологічного дослідження препарати забарвлюють за Романовським (при цьому нерідко виявляють еозинофіли, особливо в період одужання).
При дослідженні під мікроскопом гонококи мають форму коків, парно розташованих. Поверхні, звернені один до одного, кілька сплощені. Гонококи часто розташовуються купками, в гострих випадках захворювання знаходяться головним чином в лейкоцитах. При фарбуванні за Грамом знебарвлюються і забарвлюються в рожевий колір (грамнегативні).
Бактеріоскопічний метод, хоча і є основним для виявлення гонококів, має ряд недоліків: порівняно рідкісне виявлення гонококів і складність їх диференціювання від іншої кокової флори, особливо у випадках, коли проводилося лікування. Одноразовий негативний результат не доказовий, тому потрібні повторні дослідження.
При дослідженні мазків від хворих гонореєю в основному спостерігається бактеріоскопічному картина трьох видів.
1. Лейкоцити покривають все поле зору-часто гонококи розташовані внутрішньоклітинно. Є також гонококи, що лежать вільно. Інші мікроорганізми при цьому не виявляються.
2. Клітинна картина та ж сама, але гонококів немає. Стороння флора відсутня. Така картина часто спостерігається при хронічній гонореї.
3. Невелика кількість дегенерованих лейкоцитів і рясна стороння флора, поява якої говорить про поліпшення перебігу процесу.
Найцікавіші новини