Колориметричним методом по Мейленграхта можна орієнтовно визначити концентрацію білірубіну. При взаємодії сульфаниловой кислоти з нітритом натрію утворюється діазофенілсульфоновая кислота (діазосмесь), яка дає зі зв'язаним (прямим) білірубіном сироватки рожево-фіолетове забарвлення. За його інтенсивності судять про концентрацію зв'язаного білірубіну, що дає пряму реакцію. При додаванні до сироватки крові кофеїнового реактиву непов'язаний (непрямий) білірубін переходить в розчинний диссоциированное стан і також дає рожево-фіолетове забарвлення з діазосмесью одночасно з прямим білірубіном. За інтенсивністю забарвлення, що утворюється після додавання кофеїнового реактиву, визначають концентрацію загального білірубіну. За різницею між загальним і пов'язаним (прямим) білірубіном знаходять зміст незв'язаного (непрямого) білірубіну.
У 3 пробірки (для загального білірубіну, прямого і для контролю) вводять реактиви в порядку, зазначеному в табл. 25.
Для визначення прямого білірубіну в пробі вимірювання на ФЕКе проводять через 5-10 хв після додавання діазосмесі, тому що при більш тривалому стоянні в реакцію вступає непрямий білірубін.
При визначенні загального білірубіну пробу залишають стояти 20 хв. При подальшому стоянні забарвлення не змінюється.
Контроль на мутність сироватки ставлять для кожного досвіду.
Вимірювання екстинкції виробляють на ФЕКе при зеленому світлофільтрі (500-560 нм) проти води в кюветі з товщиною шару в 5 мм. З показників загального та прямого білірубіну віднімають показник контролю. Розрахунок роблять за каліброване графіком. Знаходять вміст загального та прямого білірубіну. Для визначення непрямого білірубіну із загального віднімають прямий білірубін.
Побудова калібрувального графіка зручно робити за допомогою набору "Білірубін-еталон" (фірма "Лахема", Чехія). Набір містить ліофілізований (сухий) білірубін, альбумін та інструкцію з побудови графіка.
Результати виражають у міліграмах на літр. Для цього концентрацію білірубіну, знайдену за графіком, множать на 2000, так як для дослідження було взято 0,5 мл сироватки. Коефіцієнт перерахунку в одиниці СІ (мкмоль / л) дорівнює 1,7104. У нормі вміст загального білірубіну - 8,5-20,5 мкмоль / л.
За співвідношенням концентрації білірубіну в працях С і В судять про концентраційної здатності жовчного міхура (з урахуванням можливості зниження її в порції В при розведенні жовчі запальним ексудатом). У нормі в порції В міститься 3,4-6,8 ммоль / л (200-400 мг%), а в порції С - 0,17-0,34 ммоль / л (10-20 мг%) білірубіну.
Кольорова реакція Лібермана і Бурхарда. За допомогою цього методу виробляють кількісне визначення холестерину в жовчі. Холестерин в присутності оцтового ангідриду і суміші оцтової та сірчаної кислот дає зелене забарвлення.
Для цього використовують:
1) суміш з 1 частини крижаної оцтової кислоти, 5 частин оцтового ангідриду і 1 частини концентрованої сірчаної кислоти-суміш повинна бути безбарвною або желтоватой- зберігають у посуді з темного скла з притертою пробкою в холодильнику;
2) стандартний розчин холестерину - 1800 мг / л (180 мг холестерину розчиняють в 2,5 мл хлороформу в мірній колбі місткістю 100 мл і доводять до мітки абсолютним спиртом) - розчин зберігають в посуді з темного скла з притертою пробкою, яку парафініруют- 1 мл розчину містить 1,8 мг холестерину.
До 2,1 мл суміші реактивів додають 0,1 мл досліджуваного матеріалу (жовчі). Пробірку енергійно струшують 10-12 разів і ставлять в термостат на 10 хв при температурі 37 ° С. Вимірювання проводять на ФЕКе проти реактиву 1 при червоному світлофільтрі (630-690 нм) в кюветі з товщиною шару в 5 мм.
Розрахунок ведуть за каліброване графіком.
Для калібрувального графіка готують з основного стандартного розчину холестерину ряд розведень.
Робочі стандартні розчини обробляють так само, як досвідчені проби.
Відомий ряд колориметричних методів на жовчні кислоти, в яких використовуються реакція Петтенкофера і її модифікації, засновані на взаємодії жовчних кислот з цукром в присутності сірчаної кислоти. У результаті реакції утворюється фурфурол і розчин забарвлюється в вишнево-червоний колір. Ця реакція специфічна для холевой і парних (глікохолевой і таурохолевой) кислот, решта жовчні кислоти не вступають в дану реакцію.
У нормі згідно І.А. Скуя в порції А концентрація холестерину становить 1,3-2,8 ммоль / л (50-110 мг%), холатов - 17,4-52,0 ммоль / л (670-2000 мг%) - в порції В концентрація холестерину - 5,2-15,6 ммоль / л (200-600 мг%), холатов - 57,2-184,6 ммоль / л (2200-7100 мг%) - в порції С вміст холестерину 1,1-3, 1 ммоль / л (45-120 мг%), холатов - 13,0-57,2 ммоль / л (500-2200 мг%). Наведені нормативи показують великі фізіологічні коливання складу жовчі. Н.А. Скуя пропонує вважати гіперхолестерінохоліей концентрацію холестерину вище 6,5 ммоль / л (250 мг%) в одній або декількох печінкових (порції А і С) фракціях, а гіпохолестерінохоліей - концентрацію холестерину менше 2-2,6 ммоль / л (80-100 мг %) у всіх печінкових фракціях.
Особливу практичне значення має холато-холестериновий коефіцієнт (х / х). У здорових осіб він зазвичай вище 10. Зниження х / х коефіцієнта (менше 10) є індикатором схильності до каменеутворення в жовчовивідної системі При оцінці х / х коефіцієнта необхідно зіставляти з даними мікроскопічного аналізу (виявлення скупчень кристалів холестерину, аморфних мас билирубината кальцію, мікролітів) .
Найцікавіші новини