Метод виявлення мікобактерій туберкульозу
Мікобактерії туберкульозу виявляють у мазку, пофарбованому за Цілем-Нільсеном. Фарбують карболовим фуксином Циля (1 г основного фуксину розтирають у ступці з 10 мл 96% -ного етилового спірта- приготований розчин вливають в 90 мл 7% -ного розчину фенолу, ретельно перемешівают- зберігають у посуді з темного скла). Крім того, тут необхідний 3% -ний спиртовий розчин хлористоводневої кислоти (3 мл концентрованої хлористоводневої кислоти додають до 97 мл 96% -ного етилового спирту) і 1% -ний водний розчин метиленового синього. На препарат накладають смужку фільтрувального паперу, яка повинна бути вже предметного скла. Наливають 2-3 мл карболового фуксину Циля. Тримаючи препарат пінцетом, підігрівають над полум'ям пальника до триразового відходження парів. При цьому розчиняється жіровосковая капсула мікобактерій, і вони сприймають червону фарбу.
Остуджують, папірець скидають, препарат промивають водою і повністю знебарвлюють, занурюючи скло в 3% -ний спиртовий розчин хлористоводневої кислоти. Знебарвлюються всі частини мокротиння, крім кислото- і спиртостійкі мікобактерій.
Промивають водою і дофарбовують протягом 30 сек. метиленовим синім. При цьому всі частини мокротиння забарвлюються в синій колір, крім мікобактерій туберкульозу.
Знову промивають препарат водою і висушують на повітрі. Мікроскопують з імерсійною системою. На синьому тлі добре помітні мікобактерії туберкульозу червоного кольору. Вони поліморфні, мають вигляд тонких, злегка вигнутих паличок різної довжини, можуть бути колбовідних, пунктирною форми, розташовуватися поодинці або групами.
Метод флотації Потенджера. Мікобактерії туберкульозу нерівномірно розподіляються в мокроті, при кількості менше 100 тис. В 1 мл виявити їх у препараті не завжди вдається. Методи накопичення дозволяють сконцентрувати мікобактерії. Для їх концентрації найчастіше користуються методом флотації.
В основі методу лежить адсорбція мікобактерій туберкульозу бензином, толуолом або ксилолом, які спливають на поверхні більш щільною рідини.
Для цього використовують 0,5% -ний розчин їдкого натру (або калію) - бензин (ксилол, толуол), дистильовану воду.
Свіжоприготовлену мокроту поміщають в стерильну узкогорлой пляшку місткістю 200-250 мл з добре приганяє пробкою. Для флотації достатньо 10-15 мл мокротиння. Її заливають подвійним об'ємом лугу і енергійно струшують протягом 10-15 хв в апараті для струшування. При цьому мокрота гомогенізується, розчиняються слиз і гній, звільняються мікобактерії. Потім в цю ж пляшку доливають 1 мл бензину і 100 мл дистильованої води для розрідження мокротиння. Знову струшують протягом 10-15 хв для емульгування бензину. Доливають дистильовану воду до шийки пляшки. Суміш залишають при кімнатній температурі на 40-50 хв. За цей час крапельки бензину з адсорбованими на них мікобактеріями спливають, утворюючи в шийці пляшки слівкообразние флотационное кільце.
Препарати готують на нових знежирених предметних стеклах, які попередньо підігрівають до 60 ° С на повітряній бані. На підігріті скла пастерівською піпеткою наносять краплі з флотаційного кільця, висушують і знову наносять краплі на те ж місце. Кожну наступну краплю наносять на висохлу попередню краплю. Таким чином всі флотационное кільце переносять на предметні скла. Готують 3-4 препарату, фіксують і забарвлюють за Цілем-Нільсеном.
Люмінесцентна мікроскопія
Метод заснований на тому, що туберкульозні мікобактерії, пофарбовані ауроміном, люминесцируют під впливом ультрафіолетових променів у вигляді світних золотистих паличок (метод менш трудомісткий і більш швидкий, ніж попередні).
Для діагностики туберкульозу легенів, крім бактеріоскопії мокротиння, необхідно дослідити бронхіальні змиви, промивні води шлунка, плевральний ексудат, використовуючи методи бактеріоскопії, а також посів матеріалу на спеціальні живильні середовища, метод ПЛР (полімеразно-ланцюгової реакції).
Забарвлення препаратів за Грамом
У препаратах, забарвлених за Грамом, виявляють пневмококи, клебсієли, стрептококи, стафілококи, друзи актиномицета та інші мікроорганізми.
Для цього використовують:
1) карболовий розчин генціановий фіолетового (1 г генціановий фіолетового розтирають у ступці з 10 мл 96% -ного етилового спірта- розчин вливають в 90 мл 2% -ного розчину фенолу, добре перемешівают- зберігають у пляшці з темного скла);
2) розчин Люголя (1 г йоду і 2 г йодату калію розчиняють в 5 мл дистильованої води-після розчинення наважки доливають 295 мл дистильованої води);
3) 96% -ний етиловий спирт;
4) фуксин Пфейффера (10 мл карболового фуксину Циля змішують з 90 мл дистильованої води).
Мазок фіксують над полум'ям пальника. На зафіксований мазок накладають смужку фільтрувального паперу і наливають розчин генціановий фіолетового на 1,5-2 хв. Всі частини препарату забарвлюються у фіолетовий колір. Знімають папірець і заливають мазок розчином Люголя на 2 хв. При цьому фіолетове забарвлення закріплюється на грамположительной флорі. Зливають розчин Люголя. Препарат знебарвлюють 96% -ним етиловим спиртом до сіруватого кольору. Грам флора фіолетове забарвлення зберігає. Промивають водою і дофарбовують фуксином Пфейффера протягом 10-15 сек. Всі частини препарату, крім грамположительной флори, забарвлюються в червоний колір. Знову промивають водою і висушують на повітрі.
Мікроскопують з імерсійною системою. На червоному тлі чітко видно фіолетові грампозитивнімікроорганізми. Грамнегативна флора забарвлюється в червоний колір.
Пневмококи являють собою попарно розташовані грампозитивні округлі або витягнуті диплококки, оточені капсулою. Клебсієли мають вигляд товстих грамнегативних паличок різної величини із закругленими кінцями, розташовані попарно і оточені капсулою. Стрептококи представляють собою круглі, дрібні, розташовані ланцюжками різної довжини грампозитивні коки. Знаходяться всередині лейкоцитів і серед них. Стафілококи - круглі грампозитивні коки різної величини, розташовуються одинично або групами. Часто зустрічаються одночасно зі стрептококами.
Друзи актиномицета мають вигляд сплетінь темно-фіолетового кольору. Кожна нитка сплетення закінчується колбовідних потовщенням, пофарбованим у червоний колір.
Найцікавіші новини