Основу успішної терапії аспергиллеза складають рання діагностика і своєчасне призначення ефективних антімікотіков. Проте діагностика цього захворювання утруднена, внаслідок низької ефективності мікологічних і гістологічних досліджень, і як наслідок - необхідність проведення додаткових, дуже складних і дорогих досліджень (комп'ютерна томографія та рентгенографія легенів, бронхоскопія, біопсія осередків ураження). Підтвердженням інвазивного процесу є присутність у крові антигену відповідного гриба. Однак існуючі тести виявляють сукупність антигенів Aspergillus spp., І дозволяють достовірно визначати антиген лише у хворих з важкими формами аспергиллеза.
У зв'язку з цим розробка чутливого і селективного способу визначення антигенів Aspergillus fumigatus і Aspergillus niger є досить актуальним завданням. Одним із способів вирішення цієї проблеми є використання імуноферментних сенсорів, що дозволяють проводити швидке, чутливе і селективне визначення біологічно активних речовин, у тому числі антигенів патогенних грибів.
Мета роботи: розробка амперометричних імуноферментних сенсорів (ІФП) для визначення антигену (Аг) цвілевих грибів Aspergillus niger і Aspergillus fumigatus. Розроблені ИФС складалися з біочувствітельной частини, що включає спільно іммобілізовані антитіла (Ат) проти Aspergillus niger або Aspergillus fumigatus і ферментну мітку (холіноестеразу), і трансдьюсера (стаціонарного ртутно-плівкового електроду). В основі пропонованого варіанту імуноферментного аналізу лежить поєднання реакції утворення імунного комплексу Ат-Аг на поверхні біочувствітельной частини сенсора з подальшою вольтамперометрических індикацією сигналу. Аналітичним сигналом служить висота катодного піку при потенціалі - 0,55 В, який відповідає електрохімічного процесу відновлення продукту реакції тіолу (R2SH), що утворюється в результаті катализируемого холінестеразою гідролізу специфічних сірковмісних субстратів, з матеріалом електрода ртуттю. Освіта імунного комплексу надає активуюча дію на каталітичну активність иммобилизованной холінестерази, що проявляється у збільшенні аналітичного сигналу. Величина цього ефекту лінійно залежить від логарифма концентрації Аг в досліджуваному розчині. Діапазони визначаються концентрацій складають 5х10-10-3х10 6 мг / мл для Аг Aspergillus niger і 1х108-1х10-4 мг / мл для Аг Aspergillus fumigatus.
Розроблені ИФС використовували для визначення антигенів Aspergillus fumigatus і Aspergillus niger в сироватках крові.
Дослідження сироватки крові пацієнта з підтвердженим незалежними методами (комп'ютерна томографія, культуральне дослідження індукованого мокротиння) діагнозом «аспергільоз легенів» показало наявність Аг Aspergillus fumigatus в концентрації 0,018 + 0,002 мг / мл.
Проведено визначення Аг Aspergillus niger в сироватці крові пацієнта з діагнозом «отомікоз» і «грибковий риносинусит», у якого, за даними культурального дослідження, був виділений в значній кількості Aspergillus niger. Концентрація Аг склала (7,3 ± 0,3) х10-6 мг / мл. У той же час, при дослідженні сироваток крові пацієнтів з аналогічним діагнозом, у яких виявлялися інші види грибів (в т.ч. роду Candida, Penicillium), що активує ефекту не спостерігалося, що вказує на досить високу селективність розробленого методу.
Таким чином, використання розроблених ІФС може бути доцільно при з'ясуванні етіологічної ролі цвілевих грибів Aspergillus niger, особливо при мікст-інфекціях, а також в якості додаткового інструменту комплексного лабораторного обстеження хворих при підозрах на інвазивний аспергільоз.
Найцікавіші новини